Хэт шүүлтүүрийн центрифугийн хоолойн хэрэглээ ба урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээ
1) Тохиромжтой хэт шүүлтүүрийн хоолойг сонгох.UF мембран нь янз бүрийн химийн бодисыг тэсвэрлэх чадвараараа ялгаатай гэдгийг анхаарна уу.Ихэвчлэн 10 кДа молекул жингийн хязгаартай хэт шүүлтүүрийн хоолойг 35 кДа гэх мэт сонирхож буй уургийн молекулын жингийн 1/3-аас ихгүй байх ёстой молекулын жингээр сонгож болно.Хэрэв сонирхож буй уургийн молекул жин нь 10 кд орчим байвал молекулын жингийн хязгаар нь 3 КД байдаг хэт шүүлтүүрийн хоолойг ашиглаж болно.
(2) Шинээр худалдаж авсан хэт шүүлтүүр нь хуурай, хэрэглэхийн өмнө хэт цэвэр ус нэмж, мембран, мөсөн банн эсвэл хөргөгчинд бүрэн нэвтэрсэн усыг хэдхэн минутын турш хөргөнө.Дараа нь усыг, өөрөөр хэлбэл уургийн шингэнийг асгаж, хоолойны дээд талд байгаа цагаан зураасаас илүүгүй хэмжээгээр нэмж хийнэ.Үйл ажиллагаа нь хөнгөн бөгөөд уургийн уусмал нэмэхийн өмнө хэт шүүлтүүрийн хоолойг мөсөн дээр урьдчилан хөргөх шаардлагатай.
3) Масс болон хүндийн төв хоёулаа тэнцвэрт байдалд хүрэх ёстой.Эргэлтийн хурд ба хурдатгал нь тийм ч хурдан биш, эс тэгвээс хэт шүүлтүүрийн мембраныг шууд гэмтээж байгааг анхаарна уу.Төвөөс зугтах хэт шүүлтүүрийг эхлүүлсэн (центрифуг 4 градус хүртэл урьдчилан хөргөсөн).Янз бүрийн центрифугуудын эргэлтийг g болгон хувиргасны дараа энэ нь өөр болсон.Центрифугийн хурдатгалыг хамгийн бага хэмжээнд тохируулж, мембран дээрх даралтыг бууруулсан.Центрифуг хүрэх хурддаа хүрсний дараа центрифуг орхихоо мартуузай, эсвэл танд асуудал тулгарвал та үүнийг анх удаа даван туулах боломжгүй гэдгийг анхаарна уу.Мембраныг гол руу чиглүүлэх чиглэлийг зааврын дагуу тохируулсан (өнцгийн центрифугийн хайрцаг нь мембранаас тэнхлэгт перпендикуляр байдаг).Практикт ашиглахад ерөнхий эргэлтийн хурд нь зааварт заасан хэмжээнээс бага байдаг тул центрифугийн хоолойн ашиглалтын хугацааг уртасгах боломжтой.
3) Масс болон хүндийн төв хоёулаа тэнцвэрт байдалд хүрэх ёстой.Эргэлтийн хурд ба хурдатгал нь тийм ч хурдан биш, эс тэгвээс хэт шүүлтүүрийн мембраныг шууд гэмтээж байгааг анхаарна уу.Төвөөс зугтах хэт шүүлтүүрийг эхлүүлсэн (центрифуг 4 градус хүртэл урьдчилан хөргөсөн).Янз бүрийн центрифугуудын эргэлтийг g болгон хувиргасны дараа энэ нь өөр болсон.Центрифугийн хурдатгалыг хамгийн бага хэмжээнд тохируулж, мембран дээрх даралтыг бууруулсан.Центрифуг хүрэх хурддаа хүрсний дараа центрифуг орхихоо мартуузай, эсвэл танд асуудал тулгарвал та үүнийг анх удаа даван туулах боломжгүй гэдгийг анхаарна уу.Мембраныг гол руу чиглүүлэх чиглэлийг зааврын дагуу тохируулсан (өнцгийн центрифугийн хайрцаг нь мембранаас тэнхлэгт перпендикуляр байдаг).Практикт ашиглахад ерөнхий эргэлтийн хурд нь зааварт заасан хэмжээнээс бага байдаг тул центрифугийн хоолойн ашиглалтын хугацааг уртасгах боломжтой.
(4) Үлдсэн 1мл-т төвлөрөхөд 50ул буфер уусмал авч, 10ул урсгал нэмж, хэт шүүлтүүрийн хоолойд уураг дутагдаж байгаа эсэхийг шалгахын тулд цэнхэр өнгө байгаа эсэхийг шалгана.Хэрэв хоолой гоожиж байвал дээд давхаргыг дахин асгаж, хэт шүүлтүүрийг эхлүүлэхийн тулд шинэ хоолой руу урсгана.Хоолойг алдсан эсэхийг нарийн тодорхойлохын тулд урсахаас өмнө уургийн цавуу эсвэл Брэдфордын түүхий шинжилгээгээр 5 мгмл BSA-аар 10 минутын турш центрифуг хийж, үлдсэн концентрацитай уургийн уусмалыг (мөсөн дээр ажиллаж, уургийг халаахаас сэргийлдэг) нэмнэ. бүх баяжмалыг нэмсэн.Центрифуг хийх явцад уургийн тунадас үүсч, хоолойг хаахад хүргэдэг бол болгоомжтой байгаарай.Хэрэв хур тунадас үүсвэл тунадасны тодорхой шалтгаан нь уургийн хэт их концентраци эсвэл зохисгүй буфер эсэхийг тодорхойлох;Эхнийх нь олон тооны хэт шүүлтүүрийн хоолойг нэгэн зэрэг хэт шүүж, концентрацийг бууруулж, хоёр дахь нь уургийн хур тунадас үүсэх хүртэл өөр өөр буфер уусмал солилцох замаар шийдэж болно.
(4) Үлдсэн 1мл-т төвлөрөхөд 50ул буфер уусмал авч, 10ул урсгал нэмж, хэт шүүлтүүрийн хоолойд уураг дутагдаж байгаа эсэхийг шалгахын тулд цэнхэр өнгө байгаа эсэхийг шалгана.Хэрэв хоолой гоожиж байвал дээд давхаргыг дахин асгаж, хэт шүүлтүүрийг эхлүүлэхийн тулд шинэ хоолой руу урсгана.Хоолойг алдсан эсэхийг нарийн тодорхойлохын тулд урсахаас өмнө уургийн цавуу эсвэл Брэдфордын түүхий шинжилгээгээр 5 мгмл BSA-аар 10 минутын турш центрифуг хийж, үлдсэн концентрацитай уургийн уусмалыг (мөсөн дээр ажиллаж, уургийг халаахаас сэргийлдэг) нэмнэ. бүх баяжмалыг нэмсэн.Центрифуг хийх явцад уургийн тунадас үүсч, хоолойг хаахад хүргэдэг бол болгоомжтой байгаарай.Хэрэв хур тунадас үүсвэл тунадасны тодорхой шалтгаан нь уургийн хэт их концентраци эсвэл зохисгүй буфер эсэхийг тодорхойлох;Эхнийх нь олон тооны хэт шүүлтүүрийн хоолойг нэгэн зэрэг хэт шүүж, концентрацийг бууруулж, хоёр дахь нь уургийн хур тунадас үүсэх хүртэл өөр өөр буфер уусмал солилцох замаар шийдэж болно.
(5) Уургийг баяжуулахын тулд эхний хэдэн алхмыг хийдэг бөгөөд хэрэв буферийг солих гэж байгаа бол 1 мл орчим нийт уураг дээр шинэ буфер (0.22 мм-ийн хэт шүүлтүүрээр хэт шүүлт хийх) нэмж, 3 удаа 1 мл орчим дахин баяжуулна. дараалсан удаа, эцсийн төвлөрсөн эцсийн эзэлхүүн нь хүссэн уургийн концентрациас хамааран ерөнхийдөө 500ул-аас ихгүй, гэхдээ бас 200ул дотор байна.Гурван удаад 1000 × ба түүнээс дээш хэмжээнд хүрч, хамгийн багадаа 10 × буюу түүнээс дээш эзлэхүүний баяжуулалтаар тооцоолсон буферийн өөрчлөлттэй тэнцэхүйц хэмжээнд хүр.
(5) Уургийг баяжуулахын тулд эхний хэдэн алхмыг хийдэг бөгөөд хэрэв буферийг солих гэж байгаа бол 1 мл орчим нийт уураг дээр шинэ буфер (0.22 мм-ийн хэт шүүлтүүрээр хэт шүүлт хийх) нэмж, 3 удаа 1 мл орчим дахин баяжуулна. дараалсан удаа, эцсийн төвлөрсөн эцсийн эзэлхүүн нь хүссэн уургийн концентрациас хамааран ерөнхийдөө 500ул-аас ихгүй, гэхдээ бас 200ул дотор байна.Гурван удаад 1000 × ба түүнээс дээш хэмжээнд хүрч, хамгийн багадаа 10 × буюу түүнээс дээш эзлэхүүний баяжуулалтаар тооцоолсон буферийн өөрчлөлттэй тэнцэхүйц хэмжээнд хүр.
Шуудангийн цаг: 2022 оны 11-р сарын 09-ний өдөр